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質粒DNA小(xiǎo)量提取試劑盒采用(yòng•✔β÷)SDS堿裂解法,結合矽膠膜選擇性吸附DNA的(de)方法,适合從(cóng)1-4 ml細菌培養物(wù)中提取多(duō)至20 μg質粒DNA。純化(huà)的(de)質粒DNA适合用(yòng)于酶切、PCR、測序、轉化(huà)和(hé)轉染腫瘤細胞。
本試劑盒改進了(le)裂解條件(jiàn)(Buffer P2),避免菌量極少(shǎo)時(shí)或者菌液過度老(lǎ•₹≥₩o)化(huà)時(shí)可(kě)能(néng)出現(xi♦ àn)的(de)單鏈質粒DNA;優化(huà)了(le)中和(hé)環境 (Buffer P3),徹底去(qù)除遊離(lí)SDS,避免因SDS殘留導緻的(de)酶切不(bù)完全或彌散、轉染效¥σ率低(dī)等情況。
M: DL2000, 1.5% agarose
1: 萊楓DK301 2-4: 其他(tā)公司同類産品
2:三種帶型從(cóng)下(xià)到(dγ'←₹ào)上(shàng)分(fēn)别為(wèi)超螺旋σα✘β構型、線性和(hé)nicked構型。
pUC19是(shì)2686bp的(de)小(xiǎo)型質粒,其超螺旋構型在¥>™1.5%瓊脂糖凝膠中電(diàn)泳遷移率接近(jìn)2kb線性雙鏈DNA。
萊楓DK301明(míng)顯減少(shǎo)了(le)對(duì)超螺旋質粒DNA的(de)損傷。
使用(yòng)DK301提取pTWIN1(7375BP),使用(yòng)三種凝膠濃度電(diàn)泳鑒定
每張圖片左側為(wèi)DL15,000,右側為(wèi)提取的(de)質粒DNA
1. 0.5%瓊脂糖凝膠,pTWIN1以超螺旋構型為(wèi)主;
2. 0.8%瓊脂糖凝膠,pTWIN1以超螺旋構型為(wèi)主;
3. 1.2%瓊脂糖凝膠,pTWIN1為(wèi)松散為(wèi)環狀構型,遷移率明♥"'(míng)顯大(dà)于線性構型和(hé)超$ γ₽螺旋構型;
使用(yòng)相(xiàng)對(duì)較↑×高(gāo)的(de)瓊脂糖凝膠會(huì)促使質粒超螺旋構∏✔<型松散為(wèi)環狀構型,此時(shí)質粒 ≤DNA為(wèi)封閉環或者帶切刻,電(diàn)泳遷↓©£ 移率小(xiǎo)于線性構型和(hé)超螺旋構型。