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無內(nèi)毒素質粒DNA大(dà)量提取試劑盒
無內(nèi)毒素質粒DNA大(dà)量提取試劑盒采用(yòng)SDS/堿裂解法釋放(fàng)質粒DNA，選擇性吸附質粒DNA去(qù)除絕大(dà)部分(fēn)內(nèi)毒素，✔♣≥高(gāo)鹽離(lí)子(zǐ)洗脫，進一(¥ yī)步分(fēn)相(xiàng)去(qù§∞)除殘留的(de)內(nèi)毒素，異丙醇沉£♥澱回收質粒DNA，可(kě)根據實驗需要(yào)決定DNA溶解體(tǐ)積。
DNA吸附柱-擴容管在負壓裝置上(shàng)完成吸附DNA過程，實現(xiàn)了(le)大(dà)體(tǐ)積溶液轉小(xiǎo)管操∑→作(zuò)，即後續步驟使用(yòng)1.5-2 ml離(lí)心管操作(zuò)；以平行(xí↔×"★ng)處理(lǐ)4個(gè)樣品為(wèi)例，操作(zuò)時(shí)間(×♠jiān)約150 min。
處理(lǐ)菌液體(tǐ)積與産量：100-200 ml 含高(gāo)拷貝質粒的(de)LB菌液，産量為(wèi)1-2 mg質粒DNA。
&nbsε<© p; &±★≠nbsp; ☆☆∑; 200-400 ml 含低(dī)拷貝質粒的(de)LB菌液，産量50-200 μg質粒DNA。
質量與應用(yòng)：內(nèi)毒素含量低(dī)于6 EU/mg質粒DNA，以超螺旋構型為(wèi)主，無RNA與基因組DNA殘留，可(kě)用(yòng)于細胞轉染§×與DNA疫苗。
附:鲎試劑凝膠法檢測內(nèi)毒素
規格：0.1 ml 靈敏度：0.06 EU/ml 檢測下(xià)限：0.006 EU/支（購(gòu)自(zì)廈門(mén)市(shì)鲎試劑實驗廠(chǎn<→©≠g)有(yǒu)限公司）
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檢測組 |
37℃正立放(fàng)置1小(xiǎo)時(shí)，觀察凝膠形态 |
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1. 陰性對(duì)照(zhào)：100 μl無內(nèi)毒素水(shuǐ) |
液态：材料與操作(zuò)過程無內(nèi)毒素污染 固态：材料或操作(zuò)過程有(yǒu)內(nèi)毒素污染π &≥，實驗數(shù)據無效 |
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2. 陽性對(duì)照(zhào)：用(yòng)無內(nèi)毒素水(s×φ✘§huǐ)配制(zhì)标準品至0.25 λ(0.06 EU/ml)，100 μl |
液态：鲎試劑失效，實驗數(shù)據無效 固态：鲎試劑有(yǒu)效，達到(dào)預期靈敏度$€ |
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3. 幹擾測試：1-2 μg 質粒DNA與0.25 λ标準品混合，100 μl |
液态：鲎試劑失效或檢測樣品幹擾凝膠反應，★≈∏實驗數(shù)據無效 固态：檢測樣品不(bù)影(yǐng)響凝膠反應 |
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4. 檢測樣品：1-2 μg 質粒DNA加無內(nèi)毒素水(shuǐ)至100 μl |
液态：內(nèi)毒素含量<0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) 固态：內(nèi)毒素含量>0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) |
通(tōng)常使用(yòng)本試劑盒提¶ 取的(de)質粒DNA檢測量為(wèi)1-4 μg，無凝集反應。
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